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技術(shù)文章

液相色譜儀進(jìn)樣方式

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液相色譜儀進(jìn)樣方式
 

液相色譜儀的進(jìn)樣裝置要求密封性好,死體積小,重復(fù)性好,保證中心進(jìn)樣,進(jìn)樣時對色譜系統(tǒng)的壓力和流量影響小。HPLC進(jìn)樣方式有隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣和自動進(jìn)樣器進(jìn)樣等。

一、隔膜進(jìn)樣:

        用微量注射器將樣品注入專門設(shè)計的與HPLC色譜柱相連的進(jìn)樣頭內(nèi),可把樣品直接送到色譜柱填充床的中心,死體積幾乎等于零,可獲得*柱效,且價格便宜,操作方便。但不能在高壓下使用(如10MPa以上);隔膜容易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應(yīng),使進(jìn)樣重復(fù)性只能達(dá)到1%2%;能耐各種溶劑的橡皮不易找到,常規(guī)分析使用受到限制。

二、停流進(jìn)樣:

        可避免在高壓下進(jìn)樣。但在HPLC中由于隔膜的污染,停泵或重新啟動時往往會出現(xiàn)鬼峰;保留時間不準(zhǔn)。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜中,效果較好。

三、閥進(jìn)樣:

        HPLC分析常用六通閥,其關(guān)鍵部件由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。由于閥接頭和連接管死體積的存在,柱效低于隔膜進(jìn)樣(約下降5%10%),但耐高壓(3540MPa),進(jìn)樣量準(zhǔn)確,重復(fù)性好(0.5%),操作方便。

  1、六通閥進(jìn)樣方式:

1)部分裝液法進(jìn)樣:

        進(jìn)樣時,進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%(zui多75%),要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同。

        此法進(jìn)樣的準(zhǔn)確度和重復(fù)性決定于注射器取樣的熟練程度,而且易產(chǎn)生由進(jìn)樣引起的峰展寬。

2)*裝液法進(jìn)樣:

        進(jìn)樣時,進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的510 倍(zui少3倍),這樣才能*置換定量環(huán)內(nèi)的流動相,消除管壁效應(yīng),確保進(jìn)樣的準(zhǔn)確度和重復(fù)性。

  2、六通閥使用和維護(hù)注意事項:

1)樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過濾,以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。

2)轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢,更不能停留在中間位置。否則流動相受阻,使泵內(nèi)壓力劇增,甚至超過泵的zui大壓力,再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時,過高的壓力將使色譜柱損壞。

3)為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中,每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通??捎盟疀_洗,或先用能溶解樣品的溶劑沖洗,再用水沖洗。

四、自動進(jìn)樣器進(jìn)樣:

        用于大量樣品的常規(guī)分析。

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