氣相色譜法測定大豆油中脂肪酸成分

　　一、目的與要求

　　油脂是食品加工中重要的原料和輔料，也是食品的重要組分和營養(yǎng)成分。必需脂肪酸是維持人體生理活動(dòng)的必要條件，人體所必需的脂肪酸一般取自食品用油，即食用油脂。氣相色譜法測定油脂脂肪酸組分是現(xiàn)在zui常用的方法，也是一些相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)（如：GB/T17377）規(guī)定應(yīng)用的檢測方法。

　　甲酯化是分析動(dòng)植物油脂脂肪酸成分的常用的前處理方法，也是常用的標(biāo)準(zhǔn)方法（GB/T 17376-1998）。

　　本實(shí)驗(yàn)要求了解氣相色譜法測食用油脂肪酸組成的原理，掌握樣品的前處理方法，學(xué)習(xí)食用油脂中脂肪酸組分的色譜分析技術(shù)。

　　二、原理

　　本實(shí)驗(yàn)甲酯化方法采用國標(biāo)--GB/T 17376-1998，甘油酯皂化后，釋出的脂肪酸在3氟化硼存在下進(jìn)行酯化，萃取得到脂肪酸甲酯用于氣象色譜分析。

　　樣品中的脂肪酸（甘油酯）經(jīng)過適當(dāng)?shù)那疤幚恚柞セ┖?，進(jìn)樣，樣品在汽化室被汽化，在一定的溫度下，汽化的樣品隨載氣通過色譜柱，由于樣品中組分與固定相間相互用的強(qiáng)弱不同而被逐一分離，分離后的組分，到達(dá)檢測器（detceter）時(shí)經(jīng)檢測口的相應(yīng)處理（如FID的火焰離子化），產(chǎn)生可檢測的信號(hào)。根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，歸一法確定不同脂肪酸的百分含量。

　　三、儀器與試劑

　　（一）儀器-

　　1．氣相色譜儀：，配氫火焰離子化檢測器（FID）。

　　2．恒溫水浴鍋

　　3．移液管

　　4．膠頭滴管

　　5．小圓底燒瓶

　　6．冷凝管

　　7. 樣品瓶

　?。ǘ┰噭?石油醚、已醚、氫氧化鉀、甲醇均為AR級(jí)。

　　四、實(shí)驗(yàn)步驟

　　（一）樣品預(yù)處理

　　酯化測定：

　　取0.2g油樣于10ml容量瓶中，家5.0ml   4:3石油醚-已醚，使其溶解，在加4.0ml  0.5mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液，振搖1分鐘，放置8min后加水1.0ml，靜止20min使之分層，取上層液注入色譜儀，保留時(shí)間定性，面積歸一化法定量。

　　測定：

　　（1）氣相色譜條件

　?、偕V柱：石英彈性毛細(xì)管柱，0.32mm（內(nèi)徑）×30m，內(nèi)膜厚度0.5um。

　　②程序升溫： 150℃保持3min，5℃/min升溫至220℃，保持10min；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測器溫度300℃。

　?、蹥怏w流速：氮?dú)猓?0mL/min，氫氣：40mL/min，空氣：450mL/min，分流比30﹕1。

　　④柱前壓：25kpa

　?。?）色譜分析

　　自動(dòng)進(jìn)樣，吸取0.4-1μL試樣液注入氣相色譜儀，記錄色譜峰的保留時(shí)間和峰高。利用標(biāo)準(zhǔn)圖譜確定每個(gè)色譜峰的性質(zhì)（定性），利用軟件自帶的自動(dòng)積分方法計(jì)算各脂肪酸組分的百分含量。

　　五、鑒別

　　1.測定常見植物油主要脂肪酸的構(gòu)成比并查閱有關(guān)資料，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，不同的植物油主要脂肪酸的組成大部分有相同之處，但是主要脂肪酸的含量是不相同的。根據(jù)脂肪酸組成與含量，即可鑒別油品種類。

　　2.氣相色譜法測定脂肪酸，通常用硫酸-甲醇法，和AOAC-IUPAC 標(biāo)準(zhǔn)法，我們采用了氫氧化鉀-甲醇法，經(jīng)試驗(yàn)3種方法測定結(jié)果差異無顯著性。